揭秘沙門(mén)菌血清鑒定的黑科技：實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)的革命性應(yīng)用！

2024.8.15

沙門(mén)菌是一種較常見(jiàn)的食源性腸道致病菌，是腸桿菌科中最復(fù)雜的菌屬，其抗原結(jié)構(gòu)主要由菌體抗原( O 抗原) 、鞭毛抗原( H 抗原) 及表面抗原( Vi 抗原等) 3 部分組成。根據(jù)各抗原組成的不同，可將沙門(mén)菌分為不同的血清型，目前已確認(rèn)的有2600多種血清型，我國(guó)已檢出 300 余種。

由沙門(mén)菌引起的感染性疾病是一個(gè)世界性健康難題，對(duì)全球特別是發(fā)展中國(guó)家構(gòu)成嚴(yán)重威脅，被世界衛(wèi)生組織列為具有嚴(yán)重危害或中等危害的食源性病原菌。

由不同血清型沙門(mén)菌引發(fā)的疾病類型會(huì)有所差異，沙門(mén)菌血清型的準(zhǔn)確快速鑒定對(duì)暴發(fā)流行中的溯源分析具有重要意義。

最近看到一篇由王雅靜，管紅霞，沙丹等撰寫(xiě)的專業(yè)論文《實(shí)時(shí)熒光PCＲ檢測(cè)技術(shù)在沙門(mén)菌血清鑒定中的應(yīng)用》，研究對(duì)比實(shí)時(shí)熒光PCＲ法和傳統(tǒng)的玻片凝集法在實(shí)驗(yàn)操作、檢測(cè)成本及靈敏度等方面的差異，了解實(shí)時(shí)熒光PCＲ檢測(cè)技術(shù)在沙門(mén)菌血清分型中的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

研究方法

選取 2010—2015 年無(wú)錫市健康從業(yè)人員腸道分離得到的 144 株沙門(mén)菌，分別采用傳統(tǒng)玻片凝集法和實(shí)時(shí)熒光 PCR?法（美正生物）進(jìn)行血清分型，以前者為金標(biāo)準(zhǔn)，比較兩種方法的一致性。

研究結(jié)果

144 株沙門(mén)菌利用傳統(tǒng)玻片凝集法均可分型，共鑒定出 28 個(gè)型別。兩種方法鑒定結(jié)果一致的有 134 株菌，符合率為93. 06%，Kappa 值為 0. 68，具有高度一致性。

采用實(shí)時(shí)熒光 PCＲ法鑒定沙門(mén)菌血清型，結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)的玻片凝集法具有高度一致性。有10 株菌株檢測(cè)結(jié)果與玻片凝集法不一致，可能與致病菌自身部分待測(cè)基因環(huán)境或宿主的改變發(fā)生突變，進(jìn)而基因組呈現(xiàn)多樣性有關(guān)。

4 種沙門(mén)菌優(yōu)勢(shì)血清型兩種方法分型結(jié)果完全一致，且此血清型分布與 2017年無(wú)錫市食品行業(yè)從業(yè)人員沙門(mén)菌血清分布基本一致。

玻片凝集法VS實(shí)時(shí)熒光PCＲ法

玻片凝集法直觀且可靠性高，是目前公認(rèn)的沙門(mén)菌血清分型金標(biāo)準(zhǔn)。但耗時(shí)長(zhǎng)，操作過(guò)程復(fù)雜，需嘗試的血清診斷試劑較多，鑒定成本高，常要受制于試劑種類與質(zhì)量?jī)?yōu)劣，且需多次誘導(dǎo)時(shí)具有一定鑒定難度。

部分粗糙型自凝性沙門(mén)菌利用玻片凝集法不能進(jìn)行分型。個(gè)別情況下沙門(mén)菌的抗原與血清凝集反應(yīng)程度較弱，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員經(jīng)驗(yàn)和操作水平要求高。

實(shí)時(shí)熒光PCR法是基于目標(biāo)基因簇中特定區(qū)域或基因片段，操作簡(jiǎn)單，不易出現(xiàn)差錯(cuò)，對(duì)普通實(shí)驗(yàn)人員來(lái)說(shuō)從分離培養(yǎng)、提取核酸到檢測(cè)、記錄 Ct 值、確定血清分型最多僅需要 1 d，且常規(guī)的一塊 96 孔 PCＲ板可以同時(shí)檢測(cè) 8 份樣本，極大縮短了檢測(cè)時(shí)間。

但實(shí)時(shí)熒光 PCＲ法對(duì)一些不常見(jiàn)、存在交叉情況的血清型鑒定時(shí)，尚無(wú)法準(zhǔn)確判斷沙門(mén)菌血清型。

實(shí)時(shí)熒光 PCＲ法成本為 100 元/份，操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)僅 1 d; 玻片凝集法成本為 300 元/份，操作復(fù)雜，耗時(shí) 3～5 d。

如何選擇和應(yīng)用此兩種方法？

實(shí)時(shí)熒光 PCＲ法對(duì)沙門(mén)菌進(jìn)行血清分型與玻片凝集法鑒定結(jié)果一致性高，且檢測(cè)時(shí)間較短，操作簡(jiǎn)單。

1. 對(duì)于多數(shù)常見(jiàn)的沙門(mén)菌菌株的分型鑒定，采用實(shí)時(shí)熒光 PCＲ檢測(cè)技術(shù)效果良好，尤其當(dāng)檢測(cè)量較大時(shí)，檢測(cè)效率較高。

2. 對(duì)較不常見(jiàn)或血清型存在交叉的菌株，在實(shí)時(shí)熒光 PCＲ法的基礎(chǔ)上，再有針對(duì)性地進(jìn)行凝集試驗(yàn)，可省去逐一用血清試劑做凝集反應(yīng)的繁瑣步驟，建議兩種方法聯(lián)合使用，可提高沙門(mén)菌血清分型檢測(cè)效率。

本來(lái)內(nèi)容來(lái)源：王雅靜,管紅霞,沙丹,等.實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)技術(shù)在沙門(mén)菌血清鑒定中的應(yīng)用[J].江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué)2023,34(01):105107.DOI:10.13668/j.issn.10069070.2023.01.032.

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美正生物沙門(mén)氏菌血清鑒定產(chǎn)品系列